
一、基質(zhì)本身帶來(lái)的主要干擾
動(dòng)物性樣品(肉類、內(nèi)臟、水產(chǎn)、蛋類等)基質(zhì)復(fù)雜,含有大量脂肪、蛋白質(zhì)、磷脂、色素、有機(jī)酸等內(nèi)源物質(zhì),是干擾的主要來(lái)源。
1. 脂肪干擾
高脂肪基質(zhì)中的油脂很難被充分凈化除去。殘留脂肪會(huì)附著在色譜柱頭、篩板上,逐步造成柱壓升高;同時(shí)脂肪類雜質(zhì)會(huì)在紫外檢測(cè)器上產(chǎn)生寬而平緩的背景吸收,抬高基線,造成PCP假陽(yáng)性、定量結(jié)果偏高。
2. 蛋白質(zhì)、多肽雜質(zhì)
蛋白沉淀不透徹時(shí),大分子蛋白會(huì)堵塞色譜柱填料孔隙,降低柱效;部分極性多肽在反相色譜上出峰靠前,容易與PCP峰發(fā)生部分重疊,形成峰拖尾、肩峰。
3. 天然色素(血紅素、脂溶性色素)
色素在紫外波段有較強(qiáng)吸收,在前處理凈化不充分的情況下,色素雜質(zhì)會(huì)持續(xù)污染進(jìn)樣口與色譜柱,基線噪聲變大,低濃度PCP檢出困難。
二、PCP自身化學(xué)特性引發(fā)的干擾
1. pH敏感,峰形容易畸變
PCP屬于弱酸性物質(zhì),樣品上清液pH、流動(dòng)相pH微小波動(dòng),都會(huì)改變它的解離狀態(tài),出現(xiàn)峰拖尾、保留時(shí)間漂移。
2. 容器、管路吸附損失
PCP極易吸附在普通玻璃、塑料管壁上。低濃度樣品進(jìn)樣時(shí),待測(cè)物被吸附,回收率偏低。
三、前處理過(guò)程引入的外來(lái)干擾
1. 衍生試劑殘留
如果采用柱前衍生法測(cè)定,過(guò)量衍生試劑、試劑分解產(chǎn)物會(huì)產(chǎn)生雜峰,容易和目標(biāo)峰重合。
2. 有機(jī)溶劑、濾膜析出物
過(guò)濾用有機(jī)濾膜析出物、萃取溶劑中的雜質(zhì),會(huì)在紫外區(qū)出雜峰,對(duì)低含量樣品形成干擾。
3. 酸堿中和殘留鹽
萃取過(guò)程加入酸堿調(diào)節(jié)pH,殘留無(wú)機(jī)鹽進(jìn)入色譜體系,鹽在有機(jī)相析出結(jié)晶,堵塞色譜柱。
四、色譜系統(tǒng)層面的干擾
1. 系統(tǒng)殘留(交叉污染)
高濃度標(biāo)樣進(jìn)樣后沖洗不充分,殘留到下一針樣品,出現(xiàn)** carry?over(進(jìn)樣殘留)**,低濃度樣品結(jié)果虛高。
2. 流動(dòng)相雜質(zhì)
純水、乙腈中微量紫外吸收雜質(zhì),基線抬升,檢出限變差。
五、對(duì)應(yīng)防控方案
1. 高脂肪樣品增加脫脂步驟,固相萃取(SPE)凈化去除蛋白、色素;
2. 流動(dòng)相加酸緩沖,穩(wěn)定PCP解離狀態(tài),改善峰形;
3. 低濃度樣品盡量選用硅烷化容器,減少管壁吸附;
4. 序列中間插入空白溶劑針,消除系統(tǒng)殘留;
5. 選用保護(hù)柱,截留脂肪、色素等大分子雜質(zhì),保護(hù)分析柱。


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